MS培养基母液配制有哪些注意事项?①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏水溶解,在按配方顺序依次混合;②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水;③药品应用化学纯或分析纯;④溶解生长素时,可用少量0.5–1N的NaOH或95%酒精溶解,溶解分裂素类用0.5–1N的HCl加热溶解
MS培养基母液配制有哪些注意事项?
①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏水溶解,在按配方顺序依次混合;②配制母[澳门永利mǔ]液时必须用蒸馏水或重蒸馏水;
③药品应用化学纯或分析纯{繁体:純};
④溶解生长素时,可用少量0.5–1N的NaOH或95%酒精溶解,溶解分裂素类用0.5–1N的HCl加热溶解。
MS培养基使用的注意事项?
其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。总结配置培养基的注意事项?
这里主要归纳一般情况下的培养基配制关键点,因为培养基的配制使用非常重要,从一开始就该避免异常的出现,主要有以下几个方面。(1)溶《读:róng》化:一般应放在zài 玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水,隔水加热以促其[拼音:qí]溶解,加热时应经常搅拌,防止焦结,待其溶解后补足水分。
在使用干燥培养基时,先将蒸馏水按定量加入容【róng】器中,然后称取一定量培养基干粉放入水中,静置10—15min,搅拌,振荡,或延长时间以促进溶解,一般不要热,必要时加热,但时间不宜过长,温度不宜过高,避免[练:miǎn]某些营养成分被破坏.
(2) 校正酸碱度(调节pH):培养基必须有适[shì]当的pH.因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一,测定pH的标准温【wēn】度为25士2℃.调节pH可用无菌的 1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液.当调节缓冲液的pH时,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液.灭菌后 的pH会比灭《繁:滅》菌前的pH升高或降低,一般高压灭菌前培养基的pH会{练:huì}比最终pH调高0.2左右,灭菌后基本合适。
因此对培养基、缓冲(繁体:衝)液、试剂在灭菌前[练:qián]后的 pH均进行测定,并记下每次pH的测定结果,有助于积累数据考察每种培《pinyin:péi》养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性,从而指导灭菌前pH的调节.干燥培养基一般已校正过pH,用时也必须再验证.测定时,一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化,或用pH计校正,如与所需pH不符,可用以上的酸或碱液加以校正.调 整pH后要加热过滤,使培养基澄清.
(3)培养基的分装:大批量配制时使用的自动分配器须经校准和{练:hé}确认.每次使用前后,均要对分配器的管道系{繁体:係}统进行冲【chōng】洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管.
固体培养基[拼音:jī]一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压(繁:壓)灭菌后根据需要分装平皿或(读:huò)试管.
平皿:倾注平皿,应在无菌室中放置3—4世界杯h,如用塑料平皿须在35℃培养箱中zhōng 倒置30—60min.让水蒸汽自然蒸发。
斜面:制备低层斜面分装于试管,约占容积澳门新葡京1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜{拼音:xié}度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染.
高层斜(读:xié)面:制备高层斜面分装于试管,约占试管容积的1/3,灭菌后(繁:後)趁热放置成高层短斜面,待其凝固后应用。
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天(2h内最佳)进行灭菌处理.液体、半固体培养基一般在高压灭{练:miè}前分装,约装试管容积的1/3,在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基,灭菌后再分装于灭菌试管或锥形(读:xíng)瓶(拼音:píng)中.
培养基的灭菌:培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定.普通培养基采用世界杯121℃、103.42kPa灭菌 15min,但容器和装量较大时,应延长至20min.含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min.含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血 清凝固器[练:qì]80—100℃、30min,连续3d,间歇灭菌.血清或组织液,采用低热56—58水浴1h,连续5—6d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿 素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤除菌.
高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到 全部杀灭微生物.以上的灭菌时间和温度要经过验证确《繁:確》认,如不同类型培养澳门永利基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好
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