细胞物理破碎方法的优缺点 物理破碎法的【拼音：de】优点？

物理破碎法的优点？物理破碎法：指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。1．用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂#28借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解

物理破碎法的优点？

澳门博彩1．用一定功率的超声波处理细胞悬液，使shǐ 细胞急剧震荡破裂#28借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。

机制：可娱乐城能与强声波作用溶液时，气泡产生【pinyin：shēng】、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。

超声波破碎的效率取决于声频、声能、处（繁：處）理时间、细胞浓度和细胞类《繁体：類》型【拼音：xíng】等。（使用时注意降温，防止过热）。

2. 高压破碎：细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上，被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历(繁体：歷)了高速造成【练：chéng】的剪切的碰撞及高压到常压的变化，从而破碎(练：suì)释放内含物。

这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的(练：de)方法。

3. 反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几(繁：幾)次，由{读：yóu}于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增《读：zēng》高引起溶胀，使细胞结构破碎

我想知道细胞破碎的方法及各种方法的原理和优缺点？

1. 组织[繁：織]捣碎机

将材料配成（chéng）稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐（读：zhú）步加速至所需速度。一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力【lì】很大，制备一些较大分子如核酸则很少使用。

2. 匀浆器【拼音：qì】

先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分《拼音：fēn》之几毫米距离。制作匀浆器的材料，除玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细(繁：細)胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。

存在的问开云体育题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首【拼音：shǒu】以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。

3. 研（pinyin：yán）钵

多用于细菌或其他《拼音：tā》坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提{pinyin：tí}高研磨效果。

4. 细菌磨

是一种改良了的研磨器，比(练：bǐ)研钵具有更大的研磨面积，而且低部有(练：yǒu)出口。操作时先把细{繁：細}菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。

物理法：主要通过各【拼音：gè】种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中(练：zhōng)常用的方法有：

1. 反复冻(繁体：凍)溶法

原理：因突然冷《拼音：lěng》冻【练：dòng】，细胞内冰晶的形(练：xíng)成及 胞内外溶剂浓度的突然改变而破坏细胞。

方法：将待破碎的细胞在-20度以下冰冻，室温融[pinyin：róng]解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎(拼音：suì)。

特点：此法适用于组织细胞，多用于澳门新葡京动物性材[读：cái]料，对微生物细胞作用较差。

2澳门永利. 急热骤（繁：驟）冷法

将材料投(练：tóu)入沸水中，维持85-90分钟，至水浴中急速冷却（繁：卻），此法可用于细菌及病毒材料。

3. 超声波处（读：chù）理

用一定功率的超声（繁体：聲）波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，频高于15～20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理：可能与空化现(繁：現)象引起的冲击《繁：擊》波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。

特点：操作简单，重复性较好(拼音：hǎo)，节省时间；多用于微生物和组织（繁：織）细胞的《读：de》破碎。

存在问题：超声波破碎在实验室规模应用较普遍，处理少量样品时操作简便{拼音：biàn}，液量损失少，但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递，散热均有困难，应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。空化作用是细胞破坏的直接原因，同时会产生活性氧，所以要加一些巯基保护剂[繁：劑]。

化学及生物化学xué 法：

1. 自溶法

在一(拼音：yī)定PH和适当的温度下，利用组织细胞内《繁体：內》自身的酶系统将细胞破碎的方法。此过程需较长时间，常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止[pinyin：zhǐ]细胞的污染。

2. 酶溶[pinyin：róng]法

利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶（练：méi）、脂酶等，将细胞壁分解，使细胞内含物释放出来。有些细菌对溶菌酶不敏《读：mǐn》感，加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后，使之转为对溶菌酶敏感而溶《练：róng》解。

特点（繁：點）：

a#29 此法适用多种[繁体：種]微生物；

b#29 具有作用条件温和{拼音：hé}；

c#29 内含物成分不{pinyin：bù}易受到破坏；

d#29 细胞壁损坏的程度可（练：kě）以控制。

存在的问题：易造成产物抑制作用，这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高，限制了大规模【mó】利用。若回收溶酶，则又增加百分离纯化溶酶{pinyin：méi}的操作。另外酶溶法通用性差，不同菌种需选择不同的酶

有一定局限性，不适宜大量的蛋白bái 质提取，给进一步纯化带来困难。

3. 化学（繁：學）渗透法

某些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使（pinyin：shǐ）内合物有《拼音：yǒu》选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。

特点：多用于破碎细《繁：細》菌，且作用比bǐ 较温和；提取核酸时，常用此法【拼音：fǎ】破碎细胞。

存在的问题：时间长，效率低；化学试剂毒dú 性较强，同时对产物也有毒害作用，进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂{pinyin：jì}；通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。

小结（繁体：結）

无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水《练：shuǐ》解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天（练：tiān）然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心（pinyin：xīn）需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使《读：shǐ》这些条件都要适合于目的物质的提取。

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