石蜡切片的制作步骤(附图)?1、取材确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止阻止发生进一步变化,材料体积要适宜,下图为植物芽体取样实拍。2、固定最常用的固定液为FAA(万用固定液)。它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年
石蜡切片的制作步骤(附图)?
1、取材确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止(拼音:zhǐ)阻止发生进[繁:進]一步变化,材料体积要适宜,下图为植物芽体取样实拍。
2、固定《pinyin:dìng》
最常用的固定液为FAA(万用固定液[yè])。它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年。冲洗或漂洗:组织固定后应充分水洗,除去留在组织内的固定液及其结[繁体:結]晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。下图为固定液浸泡的组织切块。
3、脱水[练:shuǐ]
目的:水[shuǐ]和透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。
试剂:梯度(pinyin:dù)酒精溶液
流【练:liú】程:70%---85%---95%--100%--- 100% 每步1h-2h左右。
注意事项:保证脱水梯度和每一(练:yī)步脱水时间,水要完全脱净,但也不能过度脱水(过久使组织变脆、收缩,这个时间大家可以根据自己的【pinyin:de】实验来摸索一下,不必完全【quán】按照本操作来)。
下图为自动组织脱水机,适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。
4、浸蜡与包埋【练:mái】
目的:用石蜡取代透明剂,使石蜡浸入组织而起支持作【zuò】用。
浸蜡(繁:蠟)程序:#28恒温#29
(1)低(读:dī)温浸[练:jìn]蜡(36℃):接上步,在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和(石蜡《繁:蠟》不能溶解),过夜12-24h。
(2)高温浸蜡(55-60℃,高于石蜡熔(练:róng)点3℃ ):
将上步二甲苯与石(拼音:shí)蜡的混合液倒出,不要倒【练:dào】掉材料,将烧杯中加入纯石蜡,共5-24h。纯石蜡需要更换[繁:換]三次。
关于石《读:shí》蜡的选择石蜡熔点:
对于较硬的材料,用熔点较高的{de}石蜡进行包埋;
当切片较薄时(在8μm以下),选(繁:選)用熔点较高的石蜡包埋;
夏季宜采[繁:採]用熔点较【练:jiào】高的石蜡《繁:蠟》(56,58℃),冬季宜选用熔点较低的石蜡(52,54℃)。
5娱乐城、切片[拼音:piàn]
传统的切片方法是【shì】将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形,澳门巴黎人粘于小木块上,上机切片。
新型的切片【练:piàn】方法是将包埋框(见下图)代(拼音:dài)替木块的支撑作用,上机切片。切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定,一般在8μm-20μm范围内。(下图为传统切片机与新型自动切片机)
6、粘片《拼音:piàn》与烤片
粘片:用(练:yòng)粘片剂将蜡【pinyin:là】片牢附于载玻片上,防止在后续的操作中材料脱落。在载玻片上涂抹粘片剂(甲液),再滴蒸馏(繁:餾)水(乙液),放上蜡片,用滤纸吸取多余的水分。
澳门新葡京烤片:将载玻片放于40℃展片台(繁体:颱)中烤干。
7、脱澳门威尼斯人蜡与复水、染(pinyin:rǎn)色
脱蜡目的:干燥后的切片需脱蜡《繁:蠟》及复水才能在水溶性染液中进行染色。
复(拼音:fù)水目的:脱蜡后的材料,如(rú)果不经过复水,直接进入染色剂中,材料将会严重变形,甚至难以染色。
染色目的:使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差(读:chà)异以便于{pinyin:yú}观察。
总体流程:二甲苯→1/2 二甲苯 1/2纯酒精→100%酒精→95%酒精→85%酒精→番红(4h以上)→95%酒精→固绿(迅速)→95%酒精(迅速)→100%酒精→1/2 二甲苯 1/2纯酒精→二甲(pinyin:jiǎ)苯→二甲苯,以上各级约需5~10分钟,已(读:yǐ)注明时间的除{读:chú}外。
染澳门巴黎人(练:rǎn)色剂:1%番红(85%酒精配制)
0.5%固绿(95%酒《拼音:jiǔ》精配制)
8、切片脱水、透明和(hé)封固
接上步,在载玻片上滴加适量(1~2滴)中性树胶,再将洁净盖玻片倾斜放下,进行封片。切片《读:piàn》放入42℃温箱中干燥过[繁体:過]夜。镜检{pinyin:jiǎn},将合格的切片贴上标签。 封固剂选择加拿大树胶(Canada balsam)或中性树胶。至此,植物组织的石蜡切片大功告成!(下图为加拿大树胶)
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