细胞物理破碎suì 方法的优缺点 物理破碎法的优点？

物理破碎法的优点？物理破碎法：指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。1．用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂#28借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解

物理破碎法的优点？

1．用一{练：yī}定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破(读：pò)裂#28借助超声的震动力破碎(suì)细胞壁和细胞器）。

机制：可能与强声波作用溶液yè 时，气泡产生、长大和破[读：pò]碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。

超声波破碎的效率取决于声《繁：聲》频、声能、处理《读：lǐ》时间jiān 、细胞浓度和细胞类型等。（使用时注意降温，防止过热）。

2. 高压破碎：细胞悬浮液从高压室的《pinyin：de》环状隙喷射到静止的撞击环上，被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造(练：zào)成的剪切的碰撞及高压到常压的变化，从而破碎（练：suì）释放内含物。

这是《拼音：shì》一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。

3. 反复冻融法：将细胞在-20度以下冰(拼音：bīng)冻，室温融解，反复几次，由于细[繁：細]胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构{练：gòu}破碎

我想知道细胞破碎的方法及各种方法的原理和优缺点？

1. 组[繁体：組]织捣碎机

将材料【读：liào】配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧《繁：緊》筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。一般用[读：yòng]于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力很大，制备一些较大分子如核酸则很少使用。

2. 匀(繁：勻)浆器

先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。制作匀浆器的材料，除玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细澳门永利胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织[繁：織]。

存在的问题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首以《pinyin：yǐ》及有些亚细胞器[读：qì]，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。

3. 研钵[繁：鉢]

多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少《拼音：shǎo》量石英砂【读：shā】，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。

4.幸运飞艇 细菌磨

是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次(练：cì)加入一小勺（练：sháo），研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。

物理法：主要通过（读：guò）各种物理因《pinyin：yīn》素使组织细胞破碎的方[读：fāng]法。在生化制备中常用的方法有：

1. 反娱乐城复冻《繁：凍》溶法

原理：因突然冷冻，细胞内冰晶的形成(拼音：chéng)及 胞内外溶剂浓度的突然改变而破《pò》坏细胞。

方法：将待破{练：pò}碎的细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细【繁：細】胞内冰粒形成和剩余细《繁：細》胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。

特点：此法适用于组织细胞，多用于动物性材料，对微生物细胞作（练：zuò）用较差。

2. 急(jí)热骤冷法

将材料投入[拼音：rù]沸水中，维持85-90分钟，至水浴中《读：zhōng》急速冷却，此[读：cǐ]法可用于细菌及病毒材料。

3. 超(练：chāo)声波处理

用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破（练：pò）裂，此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，频高于15～20KHz的超声(繁体：聲)波在【zài】高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理：可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。

特点（繁：點）：操作简单，重复性较好，节省时间；多用于微生物和组【繁：組】织细胞的[练：de]破碎。

存在问题：超声波破碎在实验室规模应用较普遍，处理少量样品时操作简便，液量损失少[读：shǎo]，但是超声波产chǎn 生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递，散热均有困难，应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。空化作用是细胞破坏的直接原因，同时会产生《读：shēng》活性氧，所以要加一些巯基保护剂。

化学及生shēng 物化学法：

1. 自溶[读：róng]法

在一定PH和适当的温度下，利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方{fāng}法。此过程需较长时间，常用少量防腐剂如甲(练：jiǎ)苯、氯《pinyin：lǜ》仿等防止细胞的污染。

2. 澳门威尼斯人酶溶法《练：fǎ》

利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等，将细胞壁分解，使细胞内含物释放出来。有些细{繁体：細}菌对溶{练：róng}菌酶不敏感，加入少量巯基试剂或(huò)8摩尔尿素处理后，使之转为对溶菌酶敏感而溶解。

特点(繁：點)：

a#29 此法{练：fǎ}适用多种微生物；

b#29 具jù 有作用条件温和；

c#29 内含物《wù》成分不易受到破坏；

d#29 细胞壁损坏的程度可以控{练：kòng}制。

存在的问题：易造成产物抑制作用，这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高，限制了大规模利用。若回收溶酶，则又增加百分离纯化溶酶的操作。另外（读：wài）酶溶法通用性差，不同菌种需选择不同的酶。有一定局限性，不适宜大量的蛋白质提取，给进一步{读：bù}纯化带来困难

3. 化学渗透法[读：fǎ]

某些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂、金属螯{练：áo}合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或huò 膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁[pinyin：bì]和膜的结构与组成。

特点：多用于破碎细菌，且作用比较[繁体澳门巴黎人：較]温和；提取核酸时，常用此法破碎细胞。

存在的问题：时间长，效率低；化学试剂毒性较强，同时对产物也有毒害作用，进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂；通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。

小[读：xiǎo]结

无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加{读：jiā}入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不【bù】是全部，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。

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