对于微生物的土壤环境样品的采集应该注意哪些问题？土壤脱离原状土后其微生物特性容易变化.采样应该快速，样品保存在低温条件下，如放入冰盒.如果要测定微生物特性，应尽快完成.如果短期内不能完成测定，可先进行
对于微生物的土壤环境样品的采集应该注意哪些问题？
土壤脱离原状土后其微生物特性容易变化.采样应该快速，样品保存在低温条件下，如放入冰盒.如果要测定微生物特性，应尽快完成.如果短期内不能完成测定，可先进行前处理，如进行提取后冷藏.微生物学基础，微生物的特征检查噬菌体有哪些方法？
5 方法5.1 噬澳门威尼斯人菌体的检查[pinyin：chá]
5.1.1 样(繁体：樣)品采集
将2～3g土样或5mL水样（如阴沟污水）放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌（大肠杆菌#28Escherichia coli#29）菌液3～5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培[读：péi]养液yè 。
5.1.2 增殖【pinyin：zhí】培养
30℃振荡培养[繁：養]12～18h， 使噬菌体增殖。
5.1.3 离心xīn 分离
将上述《读：shù》培养液yè 以3000rpm离心15～20min， 取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2～10-3，用于噬菌体检查及效《练：xiào》价测定。
5.1.4 生shēng 物测定法
5.1.4.1双层《繁体：層》琼脂平板法
5.1.4.1.1 倒【读：dào】下层琼脂
融【róng】化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。
5.1亚博体育.4.1.2倒上[pinyin：shàng]层琼脂
融化上层培养基，待融化huà 的上层《繁：層》培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 #28大肠杆菌#28Escherichia coli#29#29 菌液0.2mL，待检样品（pǐn）液或上述噬菌体增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。
5.1.4.1.3恒温培【péi】养
30℃恒温培养6～12h观察结（繁体：結）果。
5.1.4.1.4 观（繁：觀）察结果
如{练：rú}有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透{练：tòu}亮无菌圆形空斑（练：bān）──????噬菌斑。
5.1.4.2 单（读：dān）层琼脂平板法
省略下层培养基，将上(拼音：shàng)层培养基的琼[繁：瓊]脂量增加至2%，融化后冷却至45℃左右，如同上法加入指示菌和检样，混合后迅速倒平板。30℃恒温培养6～16h后观察结果。
5.1.5 离心{练：xīn}分离加热法（快速检查）
取大肠杆菌#28Escherichia coli#29正常培养液和侵染有噬菌体的异常大肠杆菌#28Escherichia coli#29培养液，4000rpm离（繁体：離）心20min，分别取两组发酵《拼音：jiào》液的上清液#28A1#29，一部分于721分光光度计上测定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于试管中，置水浴中煮沸2min（A2），检测A2溶液OD650光密度值，记录结果。
5.2 噬菌体效价的测定[拼音：dìng]
5.2.1 倒平[pinyin：píng]板
将融化后冷却到45℃左右的下层肉膏蛋白胨固体培养基倾[繁体：傾]倒于11个无菌培养皿中，每皿约倾注10mL培养基，平放，待冷凝后在培养皿底部注明噬菌体稀释[繁：釋]度。
5.2.2 稀释噬《读：shì》菌体
按10倍稀释法，吸取0.5mL大肠杆菌#28Escherichia coli#29噬菌体，注入一支装有4.5mL1%蛋白胨水的试管中，即稀释到10-1，依次稀释到10-6稀释(繁：釋)度(读：dù)。
5.3 噬菌体与(繁：與)菌液混合
将11支灭菌空试管分别标记10-4、10-5、10-6和对照。分别从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取0.1mL于上述编号的无菌试管中，每个稀释度平行做三个管，在另外两支[练：zhī]对（繁：對）照管中加0.1mL无菌水，并分别于各管中加入0.2mL大肠杆菌#28Escherichia coli#29菌悬液，振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀，置37℃水（读：shuǐ）浴中保温5min，让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。
5.4.4 接《拼音：jiē》种上层平板
将11支融化并保温于45℃的上层肉膏蛋白胨半固[gù]体琼脂培养基5mL分别加入到含有噬菌体和敏感菌液的混合管中，迅速搓匀，立即倒入相应编号的底层培养基平板表面，边倒入边摇动平板使其迅速{sù}地铺展表面。水平静置，凝固后置37℃培养。
5.5 观察并(繁体：並)计数
观察平板中的噬菌斑，并将结果记(繁体：記)录于实验报告表格内，选取每皿有30～300个噬菌斑的平板计算噬菌体（繁：體）效价。
计算公《pinyin：gōng》式： N=Y/V?X
（N：效价【jià】值，Y：平均噬菌斑数／皿，V：取样量，X：稀释度）
例[读：lì]如：当稀释度为10-6时，取样量为0.1 mL/皿，同一稀释度中3个平板上的噬菌斑（读：bān）的《pinyin：de》平均值为186个，则该样品的效价为：N＝186／0.1×10-6＝1.86×109。
6 结果[guǒ]
6.1 噬[练：shì]菌体检查
6.1.1离心分离加(jiā)热法
处理方法 OD650光[读：guāng]密度值
正常发酵液（对照） 异常{练：cháng}发酵液（试验）
离心（练：xīn）上清液#28A1#29
离心（练：xīn）上清液加热煮沸后#28A2#29
6.1.2 绘出平板上的噬《读：shì》菌斑检测结果，指出噬菌斑和宿主细菌。
6.2 噬菌体效价测定
6.2.1 平板上（练：shàng）噬菌斑数目
噬{练：shì}菌体稀释度 10-4 10-5 10-6 对照
噬菌斑(bān)数（个）/皿
平《pinyin：píng》均每皿噬菌斑数目
6.2.2 计算噬菌体效价#28即噬菌斑形成{读：chéng}单位pfu， plague-forming unit#29.
7澳门博彩 思(pinyin：sī)考
1有哪些方法可检查发酵液中确有噬菌体存在？比较其优[繁：優]缺点。
2测定噬菌体效价的原理是什么？要提高测cè 定的准确性应注意哪些操作？
3噬菌体与菌液混合后{练：hòu}保温时间越长其吸附率越高的说法对吗？
回复（繁：覆）
吸收率《练：lǜ》：在噬菌体和过量菌液混合后，菌/噬菌体混合液中未感染的噬菌体颗粒经过氯仿处理后，在不同时间点检测其数量。一般情况下几分极速赛车/北京赛车钟内噬菌体即可大部分吸附到宿主菌上.
潜伏期：细菌与噬菌体混合作用5分钟后，彻底清洗以除去未结合的噬菌体。然后用新鲜的培《拼音：péi》养基重悬至相同体积。该重悬液在370C下孵育，其间有规则地[读：dì]收集噬菌体(繁体：體)测滴度。
裂解量指的是单个宿主细菌被噬菌体完全裂解后所释放的噬菌体数{练：shù}量.具体检测方法(fǎ)本人(读：rén)也不是很清楚.
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