磷酸化和非磷酸化的抗体什么区别？ 磷酸化和非磷酸化的抗体主要区别有： 1.磷酸化抗体的检测的是出于活性状态（磷酸化）的蛋白。 2.磷酸化抗体只针对磷酸化位点设计，是一种位点特异性的多抗，这到有些单抗的特性
磷酸化和非磷酸化的抗体什么区别？
磷酸化和非磷酸化的抗体主要区别有：1.磷酸化抗体的（读：de）检测的是出于活性状态（磷酸化）的蛋白。
2.磷酸化抗体(tǐ)只针对磷酸化位点设计，是一种位点特异性的多抗，这到有{yǒu}些单抗的特（练：tè）性。
3.普通（读：tōng澳门博彩）抗体的合成（多抗）：原核表达蛋白-〉纯化-〉免疫动物-〉收获抗体。
4.磷酸化抗体合成：人工合成含磷酸化位点的多肽-〉人工体外磷酸化-澳门银河〉链接半抗原-〉免疫动物{读：wù}-〉收获抗体。
5.磷酸化的蛋白很大部《pinyin：bù》分是转录相关因子。因此使用《拼音：yòng》磷酸化抗体和普通抗体。检测同一个蛋白，原位检测可能具有不同的细胞定位。转录因子磷酸化后由细胞质进入细胞核。
6.一般而言，磷酸【suān】化蛋白的实验结果与分子功能更直接相关。 非磷酸化抗体是测该蛋白的含量，不能知道其活性状态，磷酸化抗体是测该蛋白的磷酸化水平如何，侧重于了解该蛋白的一种活性状态。 磷酸化抗体主要是针对磷酸化位点制备的，检（繁体：檢）测该蛋白在细胞受到刺激时该蛋白的变化情况(磷酸化水平增强还是减弱)。 非磷酸化抗体(主要针对非磷酸化位点的肽段制备的)主要检测组织或细胞中该蛋白的表达情况，组织分布或细胞中定位，同时可以作为磷酸化水平变化的内参等.。
用western检测磷酸化蛋白为什么要做一个去磷酸化得对照？
否则没有对照啊，我们比较的是磷酸化程度的大小，光有分子不行，还得有分母，这样出来的百分比才有可比性，非磷酸化的蛋白水平就是分母。
如何检测蛋白磷酸化？
有磷酸化的抗体， 磷酸化抗体可以识别蛋白质的磷酸化或者非磷酸化形式，而且可以在避免放射污染的情况下，对磷酸化蛋白进行定性和定量分析，因此特异性磷酸化抗体是研究蛋白质磷酸化的重要工具。肿瘤细胞中能检测到磷酸化的nf-kb吗？
NFKB都30岁了。所以，关于NFKB激活的检测可以说已经很成熟。对于[繁：於]经典澳门新葡京NFKB，Western blot 通常检测IKK/ikba/P65的磷酸化，ikba的降解情况；QPCR检测IL-6，tnfa等表达
对于非经典NFKB， WB检测p52生成；QPCR检测CXCL12/13的表达。
细胞在LPS刺激下发生炎症反应，总蛋白NF-kappaB P65的表达量如何变化？
NF－kappaB p65是NF－kappaB信号通路中的一个关键的蛋白分子，在未受到外界不良刺激时，p65与IkB－a以二聚体形式结合在细胞浆中处于静息状态。在LPS等不良刺激下，IkB－a会被降解，p65被激活，发生磷酸化，并进入细胞核，结合相应靶位，促进炎症介质表达和炎性细胞因子释放，引起炎症反应。所[练：suǒ]以，LPS刺激细胞发生炎症反应时，磷酸化的NF－kB p65表达升高，而此处提到的总的NF－kB p65应该是表达降低（读：dī）的。
想检测磷酸化的蛋白，这个磷酸的位点，怎么选择？
每个蛋白质磷酸化的位点各异，有的不止有一个磷酸化位点，有的在不同位点磷酸化以后获得的功能也会不同。楼主要选（繁：選）择的，大概是检测时所用的抗体能够识[繁体：識]别哪个磷酸化位点的epitope。如果有相关文献表示某个磷酸化位点同楼主所感兴趣的该蛋白功能相关的话，可以据此选择。如果这些信息仍然未知，楼主只好使用较为常见的抗体（读：tǐ）。
creb磷酸化控制下游的什么基因？
creb磷酸化控制下游的什么基因1.EMSA：一般都是用P标记的探针，具有放射[练：shè]性，要是用生物素标记的话，放射《拼音：shè》性就小了，但是花的钱就多了。最重要【拼音：yào】的是放射性的问题，必须有磷屏，否则没法做。
2.western blot：世界杯 这个抗体应该用磷酸化的P65抗体，，因为只有《pinyin：yǒu》磷酸化的蛋白才具有活性，你要是有钱的话，可以连总蛋白和磷酸化蛋白一起做，比较完善。
3.免疫组[繁体：組]化： 也是可以的，原理跟western blot差不多。
4.双荧光素酶：还有一种更好的澳门金沙方法就是promega的双荧光素酶报告系统，采用【yòng】海肾和萤火虫两种荧光素酶，一种报告目的基因，一种报告内参，很好的方法，但是很贵。
总体来说，做EMSA和双荧光素酶是最好的方法，算是定量，但是EMSA有放射性，双荧光素酶比[bǐ]较贵。western和免疫组化只能用来半定量，但是做的人比较多，也能发高水平(píng)的杂志，相对[繁体：對]来说比较简单，也省钱。
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