为什么要两种酶才能切割基因（两端要不同的限制酶），不能是同一种吗？当切割目标基因时，同一个序列可以用相同的限制性酶切割，但有时也可以使用不同种类的限制性酶。限制性酶切的目的是保证靶基因与质粒（载体）的准确连接，避免过多的无效连接（如：靶基因与靶基因的连接、质粒自环化等）
为什么要两种酶才能切割基因（两端要不同的限制酶），不能是同一种吗？
当切割目标基因时，同一个序列可以用相同的限制性酶切割，但有时也可以使用不同种类的限制性酶。限制性酶切的目的是保证靶基因与质粒（载体）的准确连接，避免过多的无效连接（如：靶基因与靶基因的连接、质粒自环化等）。不同限制性酶切取同一序列的原理：虽然一种限制性酶只能识别一种特定的氨基酸序列，但可以包括两种限制性酶识别的序列。例如，酶a识别ggatcc序列，而酶B识别GATC序列，则ggatcc序列可以被两个限制性酶切割。我记得我学这篇文章的时候没有说过，我不是说要把一个特定的基因转移到一个质粒中，用某种限制性酶切割质粒，用同样的限制性酶切割目标基因，然后根据我的理解将目标基因与质粒“融合”，一定有一个明显的特征无标记基因如果将目标澳门金沙基因插入其中，该基因将无法表达，导致某一代dài 表性的消失。这种表现可以很容易地观察到，以便知道哪一个成功地转移到目标基因中。
至于抗性基因，我学的时候没有这个概念。。。。
标记基因是什么？为何限制酶的切割位点在标记基因处，却不能把目的基因插在抗性基因初？
好吧，我犯了个错误。一般来说，要连接目的基因，需要使用相同或两种限制性酶来切割质粒和目标基因。在这个问题中，幸运飞艇酶II的识别序列是酶I识别序列的一部分，如果用酶II处理质粒，它将在基因I和II区域被切断，质粒将变成两个线性序列。因此质粒只能被酶Ⅰ消化，如果用酶Ⅰ处理靶基因，只有一段靶基因能与质粒相连（靶基因的左侧被酶Ⅰ切成粘端，质粒的基因Ⅰ区被酶Ⅰ切成粘端）。但目的基因的右端不能被酶消化，不能与质粒连接。质粒经酶Ⅰ切割后，在基因II区形成两个粘端（GATC），均为GATC。两者可以连接起来形成一个闭合的环《繁：環》
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