有没有做重叠延伸PCR时,刚开始扩增两个片段时,扩不出来的？由于概率太低，建议您将程序设置为五个周期94、68、72，然后连接到正常的PCR循环。有很多方法可以重叠。你可以试着不取出反应液，这是我回答的五个循环，然后，第一步得到的三个碎片尽可能以相同的浓度混合，并且数量较大，以此作为模板
有没有做重叠延伸PCR时,刚开始扩增两个片段时,扩不出来的？
由于概率太低，建议您将程序设置为五个周期94、68、72，然后连接到正常的PCR循环。有很多方法可以重叠。你可以试着不取出反应液，这是我回答的五个循环，然后，第一步得到的三个碎片尽可能以相同的浓度混合，并且数量较大，以此作为模板
然后，建立双循环PCR程序。首先（读：x开云体育iān），根据我所说的，在68℃有五个循环专门连接它们的间隙。然后，采用普通PCR方法
退火时间应设置为1分钟，延长时间应设置为5分钟和30个周期。接下来，你可以全部做了~~我的建议是准备100μL的系统，哈，如果第一个PCR的产量相同，用20μL溶解胶水，每个取10μL，模板30μL！这样，如果你的引物特异性好，没问题就可以做，如果特异性不好，果断重新设计。例如，我师兄的初级课程就很差
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