westernblot一抗孵育时用多少ml？western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗
westernblot一抗孵育时用多少ml？
western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深
一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接澳门博彩二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时[繁：時]间延长并不能完全去除背景。
western blot一抗孵育过夜具体是指孵育多少小时？
一抗孵育过夜操作方法（拼音：fǎ）：下(拼音：xià)班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿（读：ná）来孵育二抗
时间8~10个小时（读：shí），都行，
Western blot时出现条带连在一起是怎么回事？
wb时连成一条线可能有以下几种原因：1）上样量过大 这里指的是质量数过大，一般上样在20-100ug之间就幸运飞艇可以，楼主可以减半上样量，试(繁：試)试看。
2）一抗孵育时间过长，适当缩短孵育时间，也可以改善。
3）一抗浓度过大世界杯dà ，抗体如果很好用的话，增大稀释比例试试。
4）曝光时间过长，同样会由此现澳门威尼斯人象。但是这其中，上样量影响最大，建议楼主其他条件不动，减少上样量试试，可以{练：yǐ}减少一半。按照自己具体实验经验调节。
流式做简标抗体一抗，二抗分别孵多长时间？
(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体（读：tǐ）结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。(2)单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。(改良双抗体夹心法)本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入(拼音：rù)的抗体b于第一次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免疫制备的，否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵育洗涤后加底物显色进行测定
这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此，放（读：fàng）大dà 的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体(繁：體)，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。
WB一抗用什么稀释？
建议起始浓度1:200开始（当然你也可以1:100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1:100-1:1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。原液分装。抗体孵育之前稀释做WB的世界杯浓度不一定需要很高的。可以设置简单梯度1:200；1:500；1:1000 。看结果再优[繁：優]化
做westernblot的一抗孵育的原理是什么啊？
使用strippingbuffer可以去除一抗和二抗，然后可以重新利用膜。我用strippingbuffer之后还是做zuò 同一种抗体，
只不过根据ECL效果调整抗kàng 体浓度。
和重新跑胶、转(拼音：zhuǎn)膜相比，呵呵，能节省点时间。
由于[繁体：於]重复使用，蛋白信号会有一定减弱，所以我一般用三次，感觉还可以。
网上很多配方(练：fāng)，可以自己配的。
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