磷酸化和非磷酸化的抗体什么区别？ 磷酸化和非磷酸化的抗体主要区别有： 1.磷酸化抗体的检测的是出于活性状态（磷酸化）的蛋白。 2.磷酸化抗体只针对磷酸化位点设计，是一种位点特异性的多抗，这到有些单抗的特性
磷酸化和非磷酸化的抗体什么区别？
磷酸化和非磷酸化的抗体主要区别有：1.磷酸化抗《读：kàng澳门伦敦人》体的检测的是出于活性状态（磷酸化）的蛋白。
2.磷酸化抗体只针对磷酸化[练：huà]位点设计，是一种位点特异[繁体：異]性的多抗，这到有些单抗的特性。
3.普通抗体的合成（多抗）：原yuán 核表达蛋白《拼音：bái》-〉纯化-〉免疫动物-〉收获《繁：獲》抗体。
4.磷酸化抗体合成：人工合成含磷酸化huà 位点的多肽-〉澳门威尼斯人人工体外磷酸化-〉链接半抗原-〉免疫动物-〉收获抗体。
5.磷酸化的蛋白很大部分是转录相关因子。因此使用磷酸化抗体和普通抗体。检测同一个蛋白，原位检测可能具有不同的细胞定位澳门永利。转录因子磷酸化后（读：hòu）由细胞质进入细胞核。
6.一般而言，磷酸化蛋白的实验结果与分子功能更直接相关。 非磷酸化抗体是测该蛋白的含量，不能知道其活性状态，磷酸化抗体是测该蛋白的磷酸化水平如何，侧重于了解该蛋白的一种活性状态。 磷酸化抗体主要是针对磷酸化位点制备的，检测该蛋白在细胞受到刺激时该蛋白的变化情况(磷酸化水平增强还是减弱)。 非磷酸化抗体(主要针对非磷酸化位点的肽段制备的)主要检测组织或细胞中该蛋白的表达情况，组织分布或细胞中定位，同时可以作为磷酸化水平变化的内参等.。
用western检测磷酸化蛋白为什么要做一个去磷酸化得对照？
否则没有对照啊，我们比较的是磷酸化程度的大小，光有分子不行，还得有分母，这样出来的百分比才有可比性，非磷酸化的蛋白水平就是分母。
如何检测蛋白磷酸化？
有磷酸化的抗体， 磷酸化抗体可以识别蛋白质的磷酸化或者非磷酸化形式，而且可以在避免放射污染的情况下，对磷酸化蛋白进行定性和定量分析，因此特异性磷酸化抗体是研究蛋白质磷酸化的重要工具。肿瘤细胞中能检测到磷酸化的nf-kb吗？
NFKB都30岁了。所以，关于NFKB激活的检测可以说已经很成熟。对于经典NFKB，Western blot 通tōng 常检测《繁：測》IKK/ikba/P65的磷酸化，ikba的降解情况【pinyin：kuàng】；QPCR检测IL-6，tnfa等表达
对于非经典皇冠体育NFKB， WB检测p52生成；QPCR检测(繁：測)CXCL12/13的表达。
细胞在LPS刺激下发生炎症反应，总蛋白NF-kappaB P65的表达量如何变化？
NF－kappaB p65是NF－kappaB信号通路中的一个关键的蛋白分子，在未受到外界不良刺激时，p65与IkB－a以二聚体形式结合在细胞浆中处于静息状态。在LPS等不良刺激下，IkB－a会被降解，p65被激活，发生磷酸化，并进入细胞核，结合相应靶位，促进炎症介质表达和炎性细胞因子释放，引起炎症反应。所以，LPS刺激细[繁：細]胞发生幸运飞艇炎症反应时，磷酸化的NF－kB p65表达升高，而此处提到的总的NF－kB p65应该是表达降低的。
想检测磷酸化的蛋白，这个磷酸的位点，怎么选择？
每个蛋白质磷酸化的位点各异，有的不止有一个磷酸化位点，有的在不同位点磷酸化以后获得的功能也会不同。楼主要[练：yào]选择的，大概是检测时所用的抗体能够识别哪个磷酸化位点的epitope。如果有相关文献表示某个磷酸化位点同(繁：衕)楼主所感兴趣的该蛋白功能相关的话，可以据此选择。如果这些信息仍然未知，楼主只好使用较为常见的抗体。
creb磷酸化控制下游的什么基因？
creb磷酸化控制下游的什么基因1.EMSA：一般都是shì 用P标记的探针，具有放射性，要是用生物素标记的话，放射性就小了，但是花的钱就多了。最重要的是放射性的{de}问题，必须有磷屏，否则没法做。
2.western blot： 这个抗体应该用磷酸化的P65抗体，，因为只有磷酸化的蛋白才具有活性，你要是有钱的话，可以连总蛋《拼音：dàn》白和磷酸化蛋白一起做，比（拼音：bǐ）较完善。
3.免疫组化： 也是可以yǐ 的，原理跟western blot差不多。
4.双荧光素酶：还有一种更好的方法就是promega的双荧光素酶报告【pinyin：gào】系统，采用海肾和萤火虫两[繁体：兩]种荧光素酶，一种报告目的基因，一种报告内参，很好的de 方法，但是很贵。
总体来说，做EMSA和双荧光素酶是【pinyin：shì】最好的方法，算是定量，但是EMSA有放射性，双荧光素酶比较贵。western和免疫组化只能用来半定量，但是做{zuò}的人比较多，也能发高水平的杂志，相对来说比较简单，也省钱。
本文链接：http://21taiyang.com/Business-Operations/24067005.html
解读磷酸化蛋白western图《繁体：圖》转载请注明出处来源
